英国科学家利用CRISPR技术构建出一个小鼠全基因组gRNA

英国威康信任基金会桑格研究所的研究人员应用CRISPR技巧设计出多种新的导向RNAs，由此构建出一个可靶向小鼠基因组中每个基因的导向RNAs文库。这一研究有助于研究不合细胞类型中每个基因的感化。相干文┞仿揭橥于2013年12月23日的《Nature Biotechnology》杂志上。

CRISPR技巧介绍

CRISPR技巧是指应用一段与靶序列雷同的导向RNA来引导Cas9核酸酶对特异性靶向DNA进行辨认和切割，造成DNA的双链或单链断裂。

然后，细胞会应用自身具备的两种DNA复制机制：即非同源性末尾结合(Non-homologous end joining,发酵产品原料展可可豆曾经风麾阿芝台克社会，并且，这种由可可树的果实或种子作为发酵原料的起泡的巧克力风味饮料曾经在贯穿于整个古中美洲的社交和宗教生活中起到了重要的作用。, NHEJ)或同源介导的修复(Homology-directed repair, HDR)对断裂的DNA进行修复。这一技巧简单高效，科学家们可以采取标准的分子生物学技巧，随便马虎地设计出多种新的导向RNAs。

小鼠基因组CRISPR导向RNAs文库的构建

研究小组发明在测试52个导向RNAs中，有50个可成功切割基因的两个拷贝。这些遗传工程改革的导向RNAs在很多的细胞类型中似乎都取得了一致的极高成功率，由此引导他们构建出了一个可靶向小鼠基因组中每个基因的导向RNAs文库。

威康信任基金会桑格研究所的Kosuke Yusa博士说：“CRISPR技巧正在彻底变革我们研究细胞行动的方法。我们已经开辟出了一个周全的文库，其他的研究人员可应用它不合细胞类型中每个基因的感化,上海发酵展指在无氧等外源氢受体的条件下，底物脱氢后所产生的还原力[H]未经呼吸链传递而直接交某一内源性中间代谢物接受，以实现底物水平磷酸化产能的一类生物氧化反应。。我们可认为所有的细胞或物种构建出这种类型的文库。”

研究人员设计出了一个包含近90,000条如许的导向RNAs的文库，可以应用这些导向RNAs来靶向和改变小鼠基因组中所有的基因，并构建出了一些小鼠突变胚胎干细胞。他们应用小鼠突变干细胞针对一种细菌毒素：腐烂梭菌α毒素进行了一次遗传筛查，更好地懂得了对这一毒素产生抗性的机制：这种毒素对于所有的细胞类型都具有毒性效应。

gRNAs文库的应用

研究小组靶向了26个已知与这种细菌毒素受体合成相干的基因,饲料发酵展多采用自然发酵和接种商品型乳酸菌等菌种的发酵两种。采用自然发酵生产的饲料一般质量不稳定，容易受杂菌感染，猪只饲喂效果的变异较大。采用接种商品型乳酸菌等发酵生产的饲料，质量方面较易控制，但相对来说成本稍高一些。。他们揭示出个中17个基因导致了抗性产生。重要的是，他们还发清楚明了早年未知的一些基因，它们产生突变付与了对这种有毒物质的抗性。

研究小组如今将应用这一导向RNAs文库在癌细胞系中构建突变。细胞可快速地产生耐药并抵抗治疗是癌症药物治疗中的一个重要问题。经由过程筛查突变导致，研究小组可以肯定哪些基因与癌症治疗耐药有关，由此寻找莅临床靶点。